亚洲国产精品无码久久久老少,久久久久久精品免费免费999,蜜臀av免费一区二区三区,欧美性白人极品1819hd

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 全內(nèi)反射熒光顯微實(shí)驗(yàn)TIRF實(shí)驗(yàn)

全內(nèi)反射熒光顯微實(shí)驗(yàn)TIRF實(shí)驗(yàn)

更新時間:2016-07-04   更新時間:2016-07-04   點(diǎn)擊次數(shù):4361次

整合素是一種跨膜蛋白,在介導(dǎo)細(xì)胞黏附到細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過程中發(fā)揮重要的作用。整合素在和配位體結(jié)合并發(fā)揮作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血細(xì)胞中介入激活整合素這一過程的原理并不十分清晰。美國的科研人員發(fā)現(xiàn)缺少成纖維細(xì)胞,talin或kindlin都不能激活β1整合素,從而不能粘附到纖維粘聯(lián)蛋白表面上;甚至不能由Mn2+介導(dǎo)的整合素粘連構(gòu)象發(fā)生轉(zhuǎn)變。使用Mn2+可以激活talin而不是kindlin缺陷細(xì)胞的部分整合素功能,使其活化和粘附在纖維粘連蛋白表面上。而具有方向性的粘附實(shí)際是由Kindlin直接誘導(dǎo)結(jié)合樁蛋白,可以反過來會粘附斑激酶(FAK)導(dǎo)致FAK活化并形成片狀偽足。這一研究結(jié)果表明,talin和Kindlin協(xié)同激活整合素與纖維粘連蛋白的結(jié)合,并隨后Kindlin會獨(dú)自形成一個特別的信號位點(diǎn),形成新的蛋白粘附位點(diǎn)。

 

本實(shí)驗(yàn)中,采用talin和kindlin正常細(xì)胞核缺陷細(xì)胞作為樣本,對比各種細(xì)胞中整合素的分布,并且觀測加入Mn2+后,細(xì)胞行為的變化著整合素的分布。不僅采用了免疫熒光的方法進(jìn)行整合素的定位,并且在同一樣本中使用TIRF技術(shù),準(zhǔn)確定位整合素的表達(dá)。

 

Elife. 2016 Jan 27;5:e10130. doi: 10.7554/eLife.10130.

Kindlin-2 cooperates with talin to activate integrins and induces cell spreading by directly binding paxillin.

Theodosiou M1, Widmaier M1, Böttcher RT1, Rognoni E1, Veelders M1, Bharadwaj M2, Lambacher A1, Austen K1, Müller DJ2, Zent R3,4, Fässler R1.

一、實(shí)驗(yàn)材料

1)細(xì)胞: Kindctr Cell (Kindlin正常對照細(xì)胞)

          Tlnctr Cell  (talin正常對照細(xì)胞)

          Kindko Cell   (Kindlin缺陷細(xì)胞)

          Tlnko Cell    (talin缺陷細(xì)胞)    

2)試劑: fibronectin(20 μg/ml, Calbiochem)

          4%多聚甲醛PBS溶液

          0.1% Triton X-100

          3%BSA

3)培養(yǎng)耗材:µ-Slide 8孔腔室載玻片,ibiTreat底部處理 (ibidi,Germany,80826)

 

二、實(shí)驗(yàn)方法

一)載玻片包被

① 每孔加入300μl 的  20 μg/ml的fibronectin溶液

② 室溫孵育60分鐘

③ 吸除所有液體并小心用PBS沖洗5-10分鐘,即可開始使用

二)免疫熒光實(shí)驗(yàn)

1)鋪細(xì)胞,每孔鋪約100000個細(xì)胞

2)加入約300μl/孔的4%多聚甲醛的PBS溶液,靜置15分鐘

3)加入300μl 1% Triton® X-100 的PBS 溶液通透3-5分鐘

4)加入300μl 2% BSA的PBS溶液封閉20分鐘

5)依次加入一抗,二抗進(jìn)行免疫熒光染色后,沖洗小室并加入封片液進(jìn)行顯微鏡觀察(圖二)。

 

圖二:圖示鋪細(xì)胞,固定,清洗,染色步驟。

 

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

 

圖三:整合素在talin和kindlin缺陷細(xì)胞中的分布。A)共聚焦成像,顯示細(xì)胞腹部的β1整合素(綠色)和F-actin(紅色)在細(xì)胞中的分布。對比了有Mn2+存在或缺失的情況。B)共聚焦成像,顯示細(xì)胞腹部的9EG7定位結(jié)果。C)TIRF成像,顯示出β1整合素和柱蛋白的定位。D)TIRF-dSTORM采集的熱圖,顯示出局部整合素的密度。

聯(lián)


国产精品高潮呻吟AV久久动漫| 免费无码AV片在线观看潮喷| 色偷偷色噜噜狠狠成人免费视频| 久久99精品国产麻豆蜜芽| 精品一区二区三区四区在线播放| 99亚洲精品自拍AV成人软件| 性色AV一区二区三区天美传媒| 最近免费中文mv在线字幕| 大屁股熟女一区二区三区| 无码免费人妻A片AAA毛片一区| WWW色情成人免费视频软件| 日韩欧美群交P片內射中文| 国产激情久久久久久熟女老人| 国产精品中文久久久久久久 | 国产欧美久久一区二区三区| 国产又粗又黄又爽又硬的图片| 精品国产精品久久一区免费式| 日韩欧美亚洲综合久久影院DS| 亚洲色在线| 亚洲国产一区二区三区亚瑟| 午夜精品久久久久久中宇| 亚洲爆乳精品无码一区二区 | 人妻被中出不敢呻吟a片视频| 色欲AV永久无码精品无码蜜桃 | 色天天综合色天天久久婷婷| 成年轻人电影免费20岁| 草草久久久无码国产专区| 桃子视频免费完整版在线观看| 无码av天堂一区二区三区 | 凹凸在线无码免费视频| 亚洲国产一区二区A毛片| 中国男男自慰gay片免费观看| 92国产精品午夜福利免费| 三人性FREE欧美| 亚洲白嫩小受男同GV在线观看| 亚洲一区二区观看播放| 欧美亚洲日韩国产人成在线播放| 精品人妻一区二区三区| 影音先锋人妻啪啪av资源网站| 娇妻中日久久持久久| 久久久久久久精品免费久精品蜜桃|